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山东群英会任2玩法:药品微生物限度检测ppt下载

素材编号:
381506
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PowerPoint
素材格式:
.ppt
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yangyiner
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2019-10-31
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素材类别:
生物课件PPT
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药品微生物限度检测ppt

药品微生物限度检测ppt免费下载是由PPT宝藏(山东群英会走势图彩经 www.clsci.tw)会员yangyiner上传推荐的生物课件PPT, 更新时间为2019-10-31,素材编号381506。

这是药品微生物限度检测ppt,包括了微生物限度检查的意义,设备,供试品抽样、保存及检验量,实验,控制菌,沙门菌,铜绿假单胞菌,金黄色葡萄球菌,活螨等内容,欢迎点击下载。

微生物限度检查法
目录
一、简述
二、设备
三、供试品抽样、保存及检验量
四、实验
五、控制菌
一、简述   微生物限度检查的意义
细菌、霉菌、酵母菌计数是检测规定企业单位内的非灭菌制剂污染的活菌数量,是判定药品受到微生物污染程度的重要指标,也是对生产企业的药品、原料、辅料、设备器具、工艺流程、生产环境和操作者的卫生状况进行卫生学评价的综合依据之一。
细菌、霉菌、酵母菌计数均采用平板菌落计数法,这是活菌计数方法之一,也是目前国际上许多国家常用的一种方法。
该方法以在琼脂平板上,每个细菌(营养琼脂)、霉菌(玫瑰红钠琼脂)、酵母菌(玫瑰红钠琼脂或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂)形成一个独立可见的菌落为计数依据。
测定结果只反映在规定条件下所生长的细菌(一群在营养琼脂上发育的嗜中温、需氧和兼性厌氧菌)、霉菌和酵母菌的菌落数。不包括对营养、氧气、温度、PH和其他因素有特殊要求的细菌、霉菌和酵母菌。
一个细菌、霉菌和酵母菌菌落均可由一个或多个菌细胞形成。因此供试品中所测的菌落数实际为菌落形成单位数(colony forming unit ,CFU),而不应理解为细菌、霉菌、酵母菌的个数。
二、设备
1 无菌室
1.1结构和要求  无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区(面积不超过10m2,高度不超过2.4m)由缓冲间(2个)、操作间组成。
无菌室内应六面光滑平整,能耐受清洗消毒。墙与地面及墙壁、天花板连接处应呈凹弧形无缝隙,不留死角。操作间内不应安装下水道。
操作间与缓冲间之间应有样品传递箱,出入操作间和缓冲间的门不应直对。
无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内,室内光照应分布均匀,光照度不低于300勒克斯?;撼寮浜筒僮骷渚ι柚米贤庀呱本疲ǎ病?5W/m3),紫外杀菌灯应距实验台面高度不超过1M,并应定期检查辐射强度,不得低于70μW/cm2(1M距离)。不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。
1.2温度、湿度 
无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外杀菌灯杀菌效果,故温度应控制在18~26℃,相对湿度40~60%。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压、不低于4.9Pa。
1.3操作间
操作间应安装空气除菌过滤层流装置。洁净度不应低于是C级,局部净化度为A级,或放置同等级净化工作台,并准备药物天平,乙醇灯,火柴,乙醇棉等。
1.4缓冲间 缓冲间内应有洗手盆,无菌衣、帽、口罩、拖鞋等?;撼寮淠诓挥Ψ胖门嘌浜推渌游?。
1.5洁净 级 别 及 检 查方法 通常采用尘粒 数 及 浮 游 菌 数 或 沉 降 菌 数测 定 法。
洁净室(区)空气洁净度级别表
例如:沉降菌
无菌室操作台消毒擦拭处理后,先启动层流净化装置30min,将备妥的营养琼脂平板3个(经30~35℃预培养48h,证明无菌落生长。)以无菌方式(或经传递箱)移入操作间,置净化台左、中、右各1个,开盖,暴露30min后将盖盖上。
在30~35℃培养箱内倒置培养48h,取出检查。 3个平板生长的平均菌落数不超过1个。
无菌室操作台或净化工作台要定期检测其洁净度,应达到A级。净化工作台中的高效及中效过滤器应根据检测情况,必要时予以更换处理。
1.6消毒处理 无菌室应在每次操作前、后均用消毒液擦拭操作台及可能污染的死角??懔骶换爸?,同时用紫外杀菌灯照射30min。
2. 2其他设备
净化工作台、电热恒温水浴箱、培养箱、电热恒温干燥箱,微波炉(或其他适宜加热装置)、电冰箱、空调、高压蒸汽灭菌器(使用时要进行灭菌效果检查并应定期请有关部门检定)、薄膜过滤装置、电动匀浆仪等。
2、仪器及器皿
2.1菌落计数器、显微镜、电子天平或药物天平,pH计等
2.2 玻璃器皿
锥形瓶、烧杯、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、移液管等
玻璃器皿用前应洗涤干净,无残留抗菌物质吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm的适宜疏松棉花,置吸管桶内或牛皮纸袋中。锥形瓶、量筒、试管均应加棉塞或硅胶塞,再用牛皮纸包扎。玻璃器皿,均于160℃干热灭菌2h或高压蒸汽121℃灭菌30min,烘干备用。
3   用具
3.1 大、小橡皮乳头(放于干净带盖的容器中,并应定期用70%~75%乙醇溶液浸泡)。
3.2 无菌衣、帽、口罩、手套(洗净后配套,用牛皮纸包严)灭菌,备用。也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。
3.3 接种环 (白铱金或镍铬合金, 环径4~5mm、长度6~10cm)、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、灭菌剪刀或灭菌手术刀和灭菌镊子、灭菌钢锥、灭菌称样纸、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、洗手盆、实验记录纸等。
4  试液
4.1消毒液
4.1.1  0.1%新洁尔灭、0.2%过氧乙酸、75%乙醇溶液(供洗手、擦拭操作台面用)。
4.1.2  3%的来苏尔溶液、5%石碳酸溶液 (配好后装入玻璃消毒缸内, 供消毒带菌吸管用;当菌液污染台面或地面时,将其倾覆其上)
4.1.3    75%乙醇溶液
4.1.4   乳酸、15%过氧乙酸(交替用于对洁净室熏蒸消毒)
4.2 稀释剂和试剂
4.2.1    0.9%无菌氯化钠溶液  
4.2.2  无菌聚山梨酯-80(对含油性供试品具有助溶作用)
4.2.4   pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液
4.2.5   pH6.8磷酸盐缓冲液
4.2.6   pH7.6磷酸盐缓冲液等
5  培养基
5.1 营养琼脂培养基
5.2 玫瑰红钠琼脂培养基
5.3 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基
5.4 胆盐乳糖培养基
5.4 MUG培养基
培养基制备应注意:
  (1)采用干燥培养基,按说明配制,应对灭菌后的培养基pH值进行校验。若为自配培养基,原料应挑选,琼脂凝固力应测定,以确定配制时琼脂用量。试剂规格应为化学纯以上的试剂。
(2)配制的培养基不应有沉淀,如有沉淀,应于溶化后趁热过滤,灭菌后使用。
(3)培养基的分装量不得超过容器的2/3,以免灭菌时溢出。包装时,塞子必须塞紧,以免松动或脱落造成染菌。
(4)培养基配置后应在2h内灭菌,避免细菌繁殖,灭菌温度为121℃,时间为15min。。
(5)灭菌后的培养基应保存2~25℃、避光的环境,放置时间不能过长,三周内使用,以免水分散失及染菌。已熔化的培养基应一次用完,开启后不宜再用,固体培养基灭菌后只允许在融化一次。
(6)勿用电炉直接熔化琼脂培养基,以免营养成份过度受热而破坏,应用水浴或微波炉加热,融化的培养基应置于45~50 ℃ 的水浴中,不得超过8h。
(7)过期、检验剩余的或检验使用后未长菌的培养基应经煮沸后销毁;已长菌的培养基应在121 ℃灭菌30min后销毁。
视频
三、供试品抽样、保存及检验量
1 抽样
1.1  一般采用随机抽样方法,抽样量应为检验用量(2个以上最小包装单位)的3倍量(以备复试)。
1.2 抽样时,凡发现有异?;蚩梢傻难?,应选取有疑问的样品,但机械损伤、明显破裂的包装不得作为样品。
1.3 凡能从药品、瓶口(外盖内侧及瓶口周围)外观看出长螨、发霉、虫蛀及变质的药品,可直接判为不合格,无需再抽样检验。
2  保存
2.1 供试品在检验之前,应保存在阴凉干燥处,勿冷藏或冷冻,以防供试品内污染菌因保存条件不妥引起致死、损伤或繁殖。
2.2 供试品在检验之前,应保持原包装状态,严禁开启。包装已开启的样品不得作为供试品。
3检验量
即一次试验所用的供试品量(g、ml 或c㎡)。
除另有规定外,一般供试品的检验量为10g 或10ml;膜剂为100c㎡;贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品,其检验量应增加20g 或20ml(其中10g或者10ml 用于阳性对照试验)。
  
检验时,应从2 个以上最小包装单位中抽取供试品,大蜜丸还不得少于4丸,膜剂还不得少于4 片。
一般应随机抽取不少于检验用量(两个以上最小包装单位)的3 倍量供试品。
四、实验
1 将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、吸管(1ml、10ml)、量筒、稀释剂等移至无菌室内。每次试验所用物品必须事先计划,准备足够用量,避免操作中出入操作间。编号后将全部外包装(牛皮纸)去掉。
2 开启无菌室紫外杀菌灯和空气过滤装置,并使其工作不低于30min。
3 操作人员用肥皂洗手,关闭紫外杀菌灯,进入缓冲间,换工作鞋。再用消毒液洗手或用乙醇棉擦手,穿戴无菌衣、帽、口罩、手套。
4 操作前先用乙醇棉球擦手,再用碘伏棉球(也可用乙醇棉球)擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围,待干后用灭菌的手术镊或剪刀将供试品启封。
供试液的制备
供试液的制备根据供试品的理化特性与生物学特性,采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时,应均匀加热,且温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基,不得超过1 小时。
除另有规定外,常用的供试液制备方法如下。
1.液体供试品
   取供试品10ml,加pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,混匀,作为1∶10 的供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80 使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。
2.固体、半固体或黏稠性供试品
   取供试品10g,加pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,用匀浆仪或其他适宜的方法,混匀,作为1∶10 的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80,并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。
3.需用特殊供试液制备方法的供试品
(1)非水溶性供试品
        方法1    取供试品5g(或5ml),加至含溶化的(温度不超过45℃)5g 司盘80、3g 单硬脂酸甘油酯、10g 聚山梨酯80 无菌混合物的烧杯中,用无菌玻棒搅拌成团后,慢慢加入45℃的pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,边加边搅拌,使供试品充分乳化,作为1∶20 的供试液。
         方法2    取供试品10g,加至含20ml 无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的适宜容器中,必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量,充分振摇,使供试品溶解。然后加入45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml,振摇5~10 分钟,萃取,静置使油水明显分层,取其水层作为1∶10 的供试液。
(2)膜剂供试品
   取供试品100c㎡,剪碎,加100ml 的pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(必要时可增加稀释液),浸泡,振摇,作为1∶10 的供试液。
(3)肠溶及结肠溶制剂供试品
    取供试品10g,加pH6.8 无菌磷酸盐缓冲液(用于肠溶制剂)或pH7.6 无菌磷酸盐缓冲液(用于结肠溶制剂)至100ml,置45℃水浴中,振摇,使溶解,作为1∶10 的供试液。
(4)气雾剂、喷雾剂供试品
   取规定量供试品,置冰冻室冷冻约1 小时,取出,迅速消毒供试品开启部位,用无菌钢锥在该部位钻一小孔,放至室温,并轻轻转动容器,使抛射剂缓缓全部释出。用无菌注射器吸出全部药液,加至适量的pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(若含非水溶性成分,加适量的无菌聚山梨酯80)中,混匀,取相当于10g或10ml 的供试品,再稀释成1∶10 的供试液。
(5)贴膏剂供试品
   取规定量供试品,去掉贴膏剂的?;げ?,放置在无菌玻璃或塑料片上,粘贴面朝上。用适宜的无菌多孔材料(如无菌纱布)覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起。然后将其置于适宜体积并含有表面活性剂(如聚山梨酯80 或卵磷脂)的稀释剂中,用力振荡至少30 分钟,制成供试液。贴膏剂也可以其他适宜的方法制备成供试液。
稀释
吸取1:10供试液1ml置加有pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液9ml试管中,作为1:100供试液;吸取1:100级供试液1ml置加有pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液9ml试管中,作为1:1000供试液,备用。
不具抑菌活性的供试品
    常规法:取1:10级、1:100级、1:1000级供试液各1ml,注入直径90mm的无菌平皿中,加入约45℃营养琼脂培养基混匀,平行制备两个平板。(霉菌、酵母菌同上)
具抑菌活性的供试品
   当供试品有抑菌活性时,采用下列方法进行处理,以消除供试液的抑菌活性后,再依法检查。常用的方法如下。
    ①培养基稀释法      取规定量的供试液,至较大量的培养基中,使单位体积内的供试品含量减少,至不含抑菌作用。测定细菌、霉菌及酵母菌的菌数时,取同稀释级的供试液2ml,每1ml 供试液可等量分注多个平皿,倾注琼脂培养基,混匀,凝固,培养,计数。每1ml 供试液所注的平皿中生长的菌数之和即为1ml的菌落数,计算每1ml 供试液的平均菌落数,按平皿法计数规则报告菌数;控制菌检查时,可加大增菌培养基的用量。
② 离心沉淀法     取一定量的供试液, 500 转/min离心3 分钟,取全部上清液混合,用于细菌检查。
③薄膜过滤法     取供试液1ml,置于薄膜过虑器中,加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml,混均,抽滤,反复加入(不同供试品加入的量不同)抽干冲洗液后,无菌操作取出滤膜,菌面朝上贴于琼脂培养基上。
④中和法    凡含汞、砷或防腐剂等具有抑菌作用的供试品,可用适宜的中和剂或灭活剂消除其抑菌成分。中和剂或灭活剂可加在所用的稀释液或培养基中。
阴性对照实验
阴性对照实验等同于“空白实验”,即不加供试品,按同法操作所的结果,每种培养基均需做。
实验方法:取实验用的稀释剂1ml,置无菌平皿中,每次实验每种培养基各做2个平皿,倒入培养基,摇均,培养。
阴性对照平板应不得有菌生长。
五、控制菌  
一、大肠埃希菌
大肠埃希菌,为肠杆菌科埃希菌属的模式种。埃希菌属除大肠埃希菌外,新近发现有非脱羧埃希菌等四个种。
大肠埃希菌是人和温血动物肠道内的栖居菌,随粪便排出体外。
在药品中检出大肠埃希菌,表明该样品受到人和温血动物的粪便污染,即可能污染肠道病原体。大肠埃希菌除普通大肠埃希菌外尚有致病性大肠埃希菌,可引起婴幼儿、成人爆发性腹泻。为保证人体健康,口服药品必须检查大肠埃希菌。
用4-甲基伞形酮葡糖苷酸(即MUG)和靛基质试验检查大肠埃希菌是一项新技术,其检验步骤为:在胆盐乳糖培养基中增菌培养后,取0.2ml转种于5mlMUG培养基中培养,于5h、24h在366nm紫外光下观察,看是否发荧光,若荧光为阳性,不显荧光为阴性,观察后加入数滴靛基质,液面为玫红色为阳性,不显则为阴性。如果MUG、靛基质试验同为阳性或阴性即可报告结果,如MUG与靛基质试验不一致时,则需分离培养、革兰染色、镜检及生化试验鉴别。
原理:利用目标菌限定酶作用的底物的水解产物,产生颜色或荧光反应作为指示系统来鉴定目标菌。
实验证明96% 的大肠埃希菌含β-葡糖苷酸酶(β-glucuronidase,GUD),约10% 的沙门氏菌属一些菌种也含有此酶。
MUG被GUD水解,产生荧光,由于荧光反应的敏感度较颜色反应强行千万倍,易于观察,没有主观性,因而用MUG鉴定大肠埃希菌已被广泛应用于临床、食品、饮水、污水等的检测。
单一的MUG鉴别大肠埃希菌其漏检率达6%,鉴于98%的大肠杆菌靛基质试验为阳性,故将MUG-靛基质试验结合,用EMB琼脂平板分离,辅以IMViC试验(靛基质试验(I)、甲基红试验(M)、VP(乙酰甲基甲醇生成试验)、枸橼酸盐利用试验(C)四种试验 ),在理论上可使大肠杆菌的检出率达99%。
二、沙门菌
沙门氏菌属是肠杆菌科的重要致病菌,沙门菌分5个亚属,包括常见的伤寒、甲型副伤寒、乙型副伤寒、丙型副伤寒、鼠伤寒,猪霍乱等沙门菌在内,迄今已发现2000多个菌型。
药品中沙门菌,是以鉴定沙门菌属为准,即对每g(或ml)药品中是否检出沙门菌作出检验报告。
由于沙门菌菌型繁多,各菌型的生化及血清学特性虽密切相关,却不尽相同,采用一种增菌增培养基和两种分离培养基,不可能是所有沙门菌的最适增菌及分离条件。
此外,由于药品在生产过程中,常受到加热、干燥等加工步骤的影响,药品中污染的沙门菌可受到损伤或呈休眠状态,故须在增菌培养前先进行预增。步骤为:取10g或10ml在不少于200ml的营养肉汤培养基中增菌培养18~24h,再取1ml培养物,接种于10ml四硫磺酸钠亮绿培养基,培养18~24h,划线于胆盐硫乳琼脂或麦康凯琼脂培养基上,培养18~24h,观察菌落形态,判定。
三、铜绿假单胞菌
铜绿假单胞菌,习称绿脓杆菌,为假单胞菌属菌种,广泛分布在土壤,水及空气,人和动物的皮肤、肠道、呼吸道均有存在,故可通过环境和生产的各个环节污染药品。
本菌是常见的化脓性感染菌、在烧伤、烫伤,眼科及其他外科疾患中常引起继发感染,由于本菌对许多抗菌药物具有天然的耐药性,增加了治疗的难度、国内外药典均将铜绿假单胞菌检查列为检查项目之一。
铜绿假单胞菌在胆盐乳糖培养基中增菌培养18~24h,划线于溴化十六烷基三甲胺琼脂培养基平板上,观察菌落形态,判断。
革兰染色镜检及生化试验等步骤进行检验。
四、金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属中的一种,广泛分布于自然界,空气、土壤、水及物品上,人和动物皮肤及与外界相通的腔道中,也经常有本菌存在。本菌可产生多种毒素及酶,这些毒性物质能引起局部及全身化脓性炎症,严重时可发展成为败血症和脓毒血症,是人类化脓性感染中重要的病原菌。
本菌抵抗力较强,干燥情况下能生存数月,80℃30min的条件下尚能存活,5%石碳酸或0.1%升汞溶液10~15min才会被杀死。
金黄色葡萄球菌检查在营养肉汤中增菌18~24h,划线于甘露醇氯化钠琼脂培养基平板,观察菌落。
革兰染色镜检和血浆凝固酶试验等步骤进行。
本法适用于外用药品及一般滴眼剂、眼膏剂的检查。
大肠菌群
步骤:取不少于10ml的乳糖胆盐发酵培养基管3支,每只管分别加入1:10、1:100、1:1000供试品各1ml,另取一支乳糖胆盐发酵培养基管加入稀释剂1ml作为阴性对照管,培养18~24h,观察是否有酸气产生,无为未检出大肠菌群,有酸气则划线于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基,培养18~24h,观察菌落形态,判定。
五、 活螨
螨,属于节肢动物门,蛛形纲,蜱螨目。种类繁多,分布甚广。 其生活习性各异,分为自由生活和寄生生活两种类型。在土壤、池沼、江河和湖海里,动、植物体上,贮藏食品和药品中,都可能有它们的存在。
药品可因其原料、生产过程或包装、运输、贮存、销售等条件不良,受到螨的污染。
螨可蛀蚀损坏药品,使药品变质失效,并可直接危害人体或传播疾病。能引起皮炎及消化系统、泌尿系统、呼吸系统等的疾病。因此,药品特别是中成药,必须进行活螨检查。
检查方法:直接法、漂浮法、分离法
结束! 谢谢!
 

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